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His-tag TEV Protease   煙草蝕紋病毒蛋白酶
UBE-038 (1000U）
 
（1）產(chǎn)品描述：
TEV Protease(TEV蛋白酶)是來源于煙草蝕紋病毒(TEV)的Nla蛋白酶經(jīng)改進(jìn)后的27kDa的蛋白酶，經(jīng)過設(shè)計(jì)后與天然TEV蛋白酶相比其穩(wěn)定性更好。此蛋白酶被用來切除純化后融合蛋白的親和標(biāo)簽。TEV蛋白酶具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性，能夠識(shí)別EXXYXQ(G/S)的七氨基酸序列(Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-↓Gly)，最普通的是ENLYFQG，其切割位點(diǎn)在谷氨酰胺和甘氨酸或絲氨酸之間。蛋白酶在G/S(或P1`)位點(diǎn)切割多種氨基酸序列，為切割后C端融合部分提供一個(gè)想要的N端氨基酸。在PH 7.0，30℃時(shí)可達(dá)到最佳活性，但在PH 5.5-8.5和4-30℃的廣泛范圍內(nèi)TEV蛋白酶皆有活性，使得反應(yīng)條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而修改。切割后也很容易利用其C端的His-tag標(biāo)簽進(jìn)行TEV蛋白酶清除。也可以從固定在樹脂上的融合蛋白切除掉目的蛋白。
· 識(shí)別位點(diǎn)：
                      －Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓－Gly－                                                                                                                                                          
 
 · 影響天然TEV酶活性的常見因素：
1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上這些蛋白酶抑制劑對(duì)rTEV的活性沒有影響；
2）Zn離子（＞5 mM）對(duì)rTEV活性有抑制；
3）與半胱氨酸反應(yīng)的試劑也是rTEV的潛在抑制劑。
 
（2）反應(yīng)條件：
　　TEV protease蛋白酶與靶蛋白的比例是1:100（Ｗ/Ｗ）,　1mg的TEV protease能切割100mg的靶蛋白，不需要計(jì)算摩爾比率。TEV protease蛋白酶可以直接加入到靶蛋白中。不需要buffer置換和稀釋TEV protease蛋白酶。TEV protease蛋白酶和靶蛋白的比例需要實(shí)驗(yàn)來判斷，對(duì)于大多數(shù)靶蛋白來說TEV protease蛋白酶與靶蛋白的比例一般介于1:100－1:200（Ｗ/Ｗ）之間都是有效的。

（3）典型實(shí)驗(yàn)：
1mg TEV protease蛋白酶能夠切割大于90%的100mg的靶蛋白在4 °C 時(shí)反應(yīng)16h。

             1：His-TEV
             2：PQ-link-H表達(dá)載體表達(dá)的帶His-tag的Protein切割前
             3-5：PQ-link-H表達(dá)載體表達(dá)的帶His-tag的Protein切割后（4 °C 時(shí)反應(yīng)16h）