BCA蛋白定量試劑盒說明書
產(chǎn)品貨號：PA23228
產(chǎn)品規(guī)格：微孔板法（2500次）比色皿法（250次）
| 試劑盒組成 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
| BCA Protein Assay Reagent A | 250ml | 2 |
| BCA Protein Assay Reagent B | 10ml | 2 |
| BSA Standard (2mg/ml) | 1ml | 2 |
| 說明書 | 份 | 1 |
注：儲存溫度: 室溫
注意: 試劑盒處于低溫或長期保存過程中，Reagent A和Reagent B可能會產(chǎn)生沉淀，可以通過加熱的方式使沉淀溶解。如果發(fā)現(xiàn)有微生物污染，請立即丟棄試劑盒。
一．標(biāo)準(zhǔn)品和WR工作液的配置：
1. 不同濃度BSA標(biāo)準(zhǔn)品制備
根據(jù)表1所示，在干凈的管中配置一套BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)品。
表1 不同濃度BSA標(biāo)準(zhǔn)品配置方法
| 編號 | 稀釋液體積 | BSA體積 | BSA終濃度 |
| A | 0 | 300μl原液 | 2000μg/ml |
| B | 125μl | 375μl原液 | 1500μg/ml |
| C | 325μl | 325μl原液 | 1000μg/ml |
| D | 175μl | 175μl稀釋液B | 750μg/ml |
| E | 325μl | 325μl稀釋液C | 500μg/ml |
| F | 325μl | 325μl稀釋液E | 250μg/ml |
| G | 325μl | 325μl稀釋液F | 125μg/ml |
| H | 400μl | 100μl稀釋液G | 25μg/ml |
| I | 400μl | 0 | 0μg/ml=Blank |
*稀釋液為去離子水
2. BCA工作液（WR）的配置
用下面公式計算每次實驗所需WR體積：
（#標(biāo)準(zhǔn)品+#待測樣品）×（#平行樣）×（每個樣品所需WR體積）=所需WR體積
注：用比色皿測試待測樣品時，每個樣品需要2.0ml的WR；用微孔板測試待測樣品時，每個樣品需要200μl的WR。
WR液的配置，將50份的Reagent A與1份的Reagent B混合，配置成WR。
注：當(dāng)Reagent B加入到Reagent A后，溶液會出現(xiàn)渾濁，混勻后渾濁會立即消失并變成綠色澄清液體，WR能夠在室溫密保容器中穩(wěn)定保存幾天。
比色皿法測定蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)方法（樣品和WR工作液比率=1：20），操作流程如圖1所示：
吸取0.1ml的待測樣品或者標(biāo)準(zhǔn)品加入到比色皿中；
加2ml的WR工作液到含有待測樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的比色皿中混勻；
加上蓋子，將比色皿置于37攝氏度中撫育30分鐘；
冷卻到室溫；
將分光光度計波長調(diào)整至562nm，用去離子水將儀器歸零，然后測量所有樣品的光吸收值（在10分鐘內(nèi)完成）；
標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品的光吸收值應(yīng)該同時減去標(biāo)準(zhǔn)品I（Blank）的吸收值；
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的橫坐標(biāo)是標(biāo)準(zhǔn)品的蛋白質(zhì)濃度，縱坐標(biāo)是標(biāo)準(zhǔn)品的OD562的光吸收值；使用標(biāo)準(zhǔn)曲線去計算待測樣品的蛋白質(zhì)濃度；
圖1：比色皿法測量蛋白質(zhì)濃度流程圖
三.微孔板法檢測蛋白質(zhì)濃度流程（待測樣品與WR工作液的比率=1：8）
吸取25μl的標(biāo)準(zhǔn)品或者待測樣品分別加入到96孔板中；
加200μl的WR工作液到每個待測樣品或者標(biāo)準(zhǔn)品中，震蕩30s;
蓋上蓋子37攝氏度撫育30分鐘；
冷卻到室溫；
用酶標(biāo)儀或者微孔板讀板機測量562nm的光吸收（波長540-590nm均可接受，如果使用高于562nm的波長測量，撫育時間提高至2小時）；
標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品的值應(yīng)該同時減去標(biāo)準(zhǔn)品I（Blank）的吸收值；
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的橫坐標(biāo)是標(biāo)準(zhǔn)品的蛋白質(zhì)濃度，縱坐標(biāo)是標(biāo)準(zhǔn)品的OD562的光吸收值；使用標(biāo)準(zhǔn)曲線去計算待測樣品的蛋白質(zhì)濃度；